技術(shù)專欄
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RNA樣本準(zhǔn)備指南
1、樣本RNA得率以及各類項(xiàng)目最低起始量 ? 各樣本Total RNA得率統(tǒng)計(jì)（僅供參考）： 測序項(xiàng)目推薦起始量（起始量僅供參考，外泌體不允許18s/28s rRNA有峰）： 表達(dá)譜芯片及小RNA測序體液樣本及外泌體項(xiàng)目起始量（僅供參考） ? 2、各類樣本準(zhǔn)備指南 2.1 動物組織/臨床組織采集 ① 取新鮮組織，組織體積要小，盡量長寬高≤0.5cm，考慮到可操作性，所切組織塊的大小可參考綠豆顆粒的大小 ② 去除非研究的組織類型（如結(jié)締組織，脂肪組織等），如果是臨床病變組織的取材要正確判斷病變以及正常組織，應(yīng)將病變組織
2022-06-06
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淺析免疫共沉淀(Co-IP)原理和詳細(xì)實(shí)驗(yàn)步驟教程
一、原理：免疫共沉淀（Co-Immunoprecipitation）是以抗體和抗原之間的專一性作用為基礎(chǔ)的用于研究蛋白質(zhì)相互作用的經(jīng)典方法。是確定兩種蛋白質(zhì)在完整細(xì)胞內(nèi)生理性相互作用的有效方法。 其原理是：當(dāng)細(xì)胞在非變性條件下被裂解時(shí)，完整細(xì)胞內(nèi)存在的許多蛋白質(zhì)－蛋白質(zhì)間的相互作用被保留了下來。如果用蛋白質(zhì)X的抗體免疫沉淀X，那么與X在體內(nèi)結(jié)合的蛋白質(zhì)Y也能沉淀下來。 目前多用精制的prorein A預(yù)先結(jié)合固化在argarose的beads上，使之與含有抗原的溶液及抗體反應(yīng)后，beads上的prorein A就能吸附抗原達(dá)到精制的目的。這種方法常用于測定兩種目標(biāo)蛋白質(zhì)是否在體內(nèi)結(jié)
2022-06-06
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什么是ELISA--原理與分類
一、基本原理 1971年Engvall和Perlmann發(fā)表了酶聯(lián)免疫吸附劑測定（enzymelinkedimmunosorbentassay，ELISA）用于IgG定量測定的文章，使得1966年開始用于抗原定位的酶標(biāo)抗體技術(shù)發(fā)展成液體標(biāo)本中微量物質(zhì)的測定方法。 這一方法的基本原理是：①使抗原或抗體結(jié)合到某種固相載體表面，并保持其免疫活性。②使抗原或抗體與某種酶連接成酶標(biāo)抗原或抗體，這種酶標(biāo)抗原或抗體既保留其免疫活性，又保留酶的活性。在測定時(shí)，把受檢標(biāo)本（測定其中的抗體或抗原）和酶標(biāo)抗原或抗體按不同的步驟與固相載體表面的抗原或抗體起反應(yīng)。用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗
2022-05-23
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內(nèi)參抗體怎么選
內(nèi)參抗體可用于評價(jià)蛋白質(zhì)免疫印跡法(Western Blot)的效率，比較凝膠中每孔的蛋白上樣量。此類對照可幫助確定樣品間表達(dá)水平的差異，以判斷是由細(xì)胞裂解物的實(shí)際蛋白水平導(dǎo)致，還是由上樣量的差異導(dǎo)致。 內(nèi)參抗體主要功能 （1）檢測整個(gè)WB流程是否正常 （2）檢測基因表達(dá)產(chǎn)物是否正確 （3）比較產(chǎn)物微量的相對變化 （4）評價(jià)各個(gè)上樣孔內(nèi)蛋白的總量是否基本一致 圖一示例 內(nèi)參抗體在目標(biāo)蛋白的免疫熒光研究中，也可以作為共染的陽性對照。內(nèi)參抗體分為未標(biāo)記型和標(biāo)記型，標(biāo)記物包括生物素、HRP、FITC、PE、Cy染料和Alexa Fluor染料。
2022-05-11
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ELK Biotechnology歸納Elisa實(shí)驗(yàn)中樣本的制備與保存
樣品收集注意事項(xiàng) 1. ? 樣品收集后若在1周內(nèi)進(jìn)行檢測的可保存于4℃，若不能及時(shí)檢測，請按一次使用量分裝 （ELK Biotechnology單指標(biāo)夾心法試劑盒，單孔標(biāo)準(zhǔn)上樣量為100μl?），凍存于-20℃(1個(gè)月內(nèi)檢測)，或-80℃(3個(gè)月內(nèi)檢測)，避免反復(fù)凍融。融化樣本在試驗(yàn)前請?jiān)俅坞x心以去除凍融后可能出現(xiàn)的沉淀物。 2. ? 試劑盒檢測范圍不等同于樣本的濃度范圍，如果您的樣品中檢測物濃度高于標(biāo)準(zhǔn)品最高值，請根據(jù)實(shí)際情況，做適當(dāng)倍數(shù)稀釋(建議查閱文獻(xiàn)后先做預(yù)實(shí)驗(yàn)，以確定稀釋倍數(shù))。 3. ? 若所檢樣本不在說明書所列樣本之中，建議做預(yù)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證其檢測有效性。
2022-05-04
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通過兩種軟件計(jì)算ELISA結(jié)果
方法一：使用Curve Expert1.4軟件（點(diǎn)擊下載Curve Expert1.4） 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 可以采用各種繪圖軟件來繪制ELISA標(biāo)準(zhǔn)曲線，下面以“Curve Expert1.4”軟件為例，繪制ELISA標(biāo)準(zhǔn)曲線的方法如下； 1．啟動“Curve Expert” 2．X軸輸入標(biāo)準(zhǔn)品的OD值（雙抗夾心輸入OD-空白值），Y軸輸入所對應(yīng)的濃度值，如圖： 3．單擊[運(yùn)行] 按鈕，出現(xiàn)如下對話框 4．單擊[ok
2022-05-04
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ELISA實(shí)驗(yàn)操作視頻
2022-04-26
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Westernblot實(shí)驗(yàn)蛋白提取
貼壁細(xì)胞總蛋白提?。? 用TBS緩沖液潤洗貼壁細(xì)胞2-3次，最后一次盡量吸干殘留液。加入適當(dāng)體積的細(xì)胞總蛋白提取試劑(使用前數(shù)分鐘內(nèi)加入蛋白酶抑制劑)于培養(yǎng)板/瓶內(nèi)裂解3-5min。期間反復(fù)晃動培養(yǎng)板/瓶，使試劑與細(xì)胞充分接觸。用細(xì)胞刮刀將細(xì)胞及試劑刮下，收集到1.5mL離心管中。冰浴30min，期間用移液器反復(fù)吹打，確保細(xì)胞完全裂解。4℃13000g離心5min，收集上清，即為總蛋白溶液。 懸浮細(xì)胞總蛋白提?。? 低速離心收集細(xì)胞，加入適當(dāng)體積的冷卻的PBS緩沖液重懸，2000rpm離心10min，吸除上清。重復(fù)以上操作兩次，收集細(xì)胞沉淀。加入適當(dāng)體積的細(xì)胞總蛋白提取試劑(使用
2021-08-14
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